蚕素是家蚕中的一个结构上与胰岛素相关和功能上类似促前胸腺素的小肽。蚕素基因编码一个前体分子,包括四个区域:信号肽、B链、C肽、A链,同时,他们与脊椎动物的核苷酸序列有一定的相似性。蚕素分为不同的家族,目前已确定A-G七个家族,并且通过生物信息学分析A链和B链的氨基酸序列,他们具有高度的同源性。通过研究发现,我们从本实验室构建的家蚕蛹cDNA中筛选到一条序列,生物信息学分析发现与其他蚕素家族有很高的同源性,故命名为Bombyxin H(一个新家族成员)。通过PCR扩增获得H基因,通构建原核表达载体pET-28a-Polh-Bombyxin H(将Bombyxin H ORF框序列中的信号肽被切除),转化到大肠杆菌BL21(DE3)高效表达重组融合蛋白,利用多角体蛋白的性质通过pH 值调节、离心及镍柱亲和层析来分离纯化重组融合蛋白,。我们利用Bac-to-Bac系统设计一组对照试验: 1.构建pFastBac1-Polh-Bombyxin H,即加多角体(Polh),Bombyxin H基因没有信号肽(SP,Signal Peptide);2. 构建pFastBac1-Polh-Bombyxin H,即加多角体,Bombyxin H基因有信号肽;3.构建pFastBac1-Bombyxin H, 即不加多角体,Bombyxin H基因带有信号肽。最终将构建的三种重组病毒分别感染正常家蚕BmN细胞,经Western blot和Dot blot鉴定,结果证明Bombyxin H在家蚕细胞中获得成功表达,为新发现的蚕素H基因的蛋白纯化和功能研究打下基础。
特别声明:本站注明稿件来源为其他媒体的文/图等稿件均为转载稿,本站转载出于非商业性的教育和科研之目的,并不意味着赞同其观点或证实其内容的真实性。如转载稿涉及版权等问题,请作者在两周内速来电或来函联系。