红麻野败型CMS胞质SNP分子标签的发掘
在基于SRAP分子标记技术筛选的红麻野败型CMS胞质分子标签--Me14/Em8的基础上,通过在GenBank中的同源检索发现Me14/Em8引物组合的PCR扩增片段(SRAP-M1)与棉花EST(ES843192)及烟草线粒体基因组的一段序列(148406-148661)相似度分别达99%和97%。进而根据烟草线粒体基因组序列(148406-148661)及ES843192在Me14引物结合位点上游的同源性,在不育系P3A和保持系P3B mtDNA中同源克隆获得一段包括Me14引物结合位点上游67 bp侧翼序列在内的红麻线粒体基因组片段,命名为E1。测序结果表明E1片段在Me14结合位点处存在2个SNP位点。在其中一个A/G转换的SNP位点处,HpaⅡ内切酶可特异性地酶切以保持系和恢复系总DNA为模板扩增获得的E1纯化片段,而不育系和F1杂种的E1纯化片段不能被酶切。同时RT-PCR结果表明,E1的转录水平在不育系P3A和保持系P3B中的时空表达模式无差异,在GenBank中也没有与E1相匹配的蛋白序列。该CMS胞质SNP分子标签可视为红麻不育胞质mtDNA进化的特异事件。
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