家蚕多角体蛋白基因在大肠杆菌中的表达
本文对克隆得到的家蚕多角体蛋白基因 (polyhedron, polh) 进行生物信息学分析,结果表明该基因序列长为 738 bp ,编码 246 个氨基酸,预测分子量为 28.85 kDa 。将polh 基因克隆到含6×His标签的原核表达载体 pET-28a上,构建重组表达载体pET-28a-polh。将该重组子转化到大肠杆菌菌株 BL 21 中,用终浓度为 1 mM IPTG 诱导表达,表达产物作 SDS-PAGE分析,在 35.0 kDa (计算后的分子量为 32.41 kDa) 附近的位置有一条特异性蛋白条带,与预期值 (融合标签 3.56 kDa ,polh 28.85 kDa) 相符。进一步采用超声裂解菌体,经12000 rpm 离心,将分离的上清和沉淀,采用 SDS-PAGE 分析,结果表明表达的融合蛋白主要存在于沉淀中。
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