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HC-Pro三个参与抑制RNA沉默氨基酸位点的鉴定
2012-01-16 中国科技论文在线 王洁 刘金亮 阴筱 高瑞 刘红梅 李向东 刘焕庭

  马铃薯Y病毒属病毒编码的辅助成分-蛋白酶(helper component-proteinase,HC-Pro)是第一个被鉴定的RNA沉默抑制因子。本研究利用农杆菌共浸润的方法分析了马铃薯A病毒(PVA)HC-Pro三个位点氨基酸的突变对抑制RNA沉默活性的影响。结果显示,Phe6、Asn11的缺失降低了PVA HC-Pro抑制RNA沉默活性,IGN基序中的Ile250和Gly251分别突变为Asp和Glu 使HC-Pro完全丧失了抑制RNA沉默活性。荧光的强弱与绿色荧光蛋白的表达量和GFP mRNA的量正相关,而与GFP siRNA的积累量呈负相关。这些结果表明IGN对于PVA HC-Pro抑制RNA沉默是必需的,HC-Pro调控基因组复制和抑制RNA沉默的功能域部分重合;保守氨基酸Phe7和糖基化位点Asn12对于抑制RNA沉默活性不是必需的,但可以调控PVA HC-Pro抑制RNA沉默活性的强弱。

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