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遗传性BALB/cCat/Cat白内障小鼠胚胎干细胞建系
2012-03-23 中国科技论文在线 张丽青 刘韬 杨宝田 周秀梅 栎蓉 钱其军
  目的 建立遗传性BALB/c白内障小鼠的胚胎干细胞系。方法取3.5 dpc的白内障小鼠囊胚,用添加了小分子抑制剂CHR99021和PD0325901(2i)的无血清培养液在胚胎成纤维细胞(MEF)上培养。当出现ES细胞样克隆后,转到无饲养层条件下,用2i培养液传代培养得到稳定的胚胎干细胞系。从形态、染色体数目、碱性磷酸酶活性、Oct4等多潜能基因表达、体内外分化能力及形成嵌合鼠能力等多方面对获得的胚胎干细胞进行鉴定。结果成功建立了6株遗传性BALB/cCat/Cat白内障小鼠胚胎干细胞系,该BALB/cCat/CatES细胞呈集落状生长,正常核型率达80%,具高碱性磷酸酶活性,表达ES细胞表面特异性抗原SSEA1及多潜能性转录因子Oct4等;拟胚体实验和畸胎瘤实验证实BALB/cCat/CatES在体内外均具有向三个胚层分化的能力。通过胚胎聚合方法获得了4只嵌合鼠,其中3只患先天性白内障。结论 用2i培养体系可在无饲养层情况下成功建立遗传性白内障小鼠胚胎干细胞系。

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